重组人神经生长因子rh-β-ngf真核表达载体的构建及其在hek293细胞中的表达

为大量制备β-ngf，构建了一种稳定、高效表达重组人神经生长因子(recombinanthumannervegrowthfactor,rh-β-ngf)的真核表达载体及含该重组载体的hek293细胞株。首先，构建重组质粒pcmv-β-ngf-ires-dhfr并转染至hek293细胞系，用mtx加压筛选和有限稀释法进行选择，获得高效表达rh-β-ngf的单克隆重组细胞株；随后逐步降低血清培养，最终使细胞株完全适应无血清培养基并稳定表达rh-β-ngf；sds-page分析该表达产物，可见相对分子质量约13kda的条带，纯度大于50％，经质谱法测定得到其肽图谱与理论序列完全匹配，接着利用离子交换层析和分子筛层析纯化rh-β-ngf；最后进行重组细胞株表达效率和表达稳定性检测，表明重组细胞株可稳定、高效表达rh-β-ngf，其分泌效率大于20pg/(cell?d)，并能诱导pc12细胞的分化，具有良好的生物学活性。