小梅山猪骨髓间充质干细胞cx43基因修饰

通过在小梅山猪骨髓间充质干细胞(bmscs)中过表达缝隙连接蛋白43基因(cx43)，探究cx43对小梅山猪bmscs增殖及凋亡的影响，为构建转基因动物模型奠定基础。利用分子技术构建cx43真核表达载体pegfp-cx43，nucleofectortm法转染p3代bmscs，检测细胞转染效率，经rt-pcr、免疫荧光和westernblotting鉴定cx43的表达，流式细胞技术分析bmscs的增殖能力和凋亡情况。酶切鉴定和测序结果表明，pegfp-cx43真核表达载体构建成功，转染bmscs后，egfp阳性细胞约占60%。转基因bmscs中cx43蛋白表达显著增加，细胞增殖能力显著提高、凋亡率显著下降。结果表明，在小梅山猪bmscs中过表达cx43不仅能促进细胞增殖而且抑制其凋亡，为下一步在体研究奠定了基础。