携带hiv-1抗原的单纯疱疹病毒载体疫苗的构建及鉴定

利用细菌人工染色体技术将串联的hiv-1gp160、gag和protease基因以及表达元件插入1型单纯疱疹病毒(herpessimplexvirustype1,hsv-1)内部反向重复序列区，以获得携带hiv-1抗原的单纯疱疹病毒载体疫苗。首先将hiv-1gp160(b型和c型)、gag和protease基因串联克隆入pcdna3获得重组质粒pcdna/gbgp和pcdna/gcgp，重组质粒转染293ft细胞，westernblotting检测hiv抗原表达。继而将pcdna/gbgp和pcdna/gcgp中包括hiv-1抗原基因和表达元件的表达框克隆入pko5/bn获得重组穿梭质粒pko5/bn/gbgp和pko5/bn/gcgp，穿梭质粒电转含bac-hsv的大肠杆菌，筛选重组菌，提取重组dna并转染vero细胞，挑取病毒蚀斑纯化重组病毒，southernblotting鉴定重组病毒dna，westernblotting检测重组病毒感染细胞中hiv抗原表达，并分析病毒的增殖特性。结果表明，westernblotting在pcdna/gbgp和pcdna/gcgp转染的293ft细胞中检测到表达的gp160和gag蛋白。pko5/bn/gbgp和pko5/bn/gcgp分别电转获得重组菌，并从重组dna转染的vero细胞中纯化获得重组hsv，southernblotting检测表明重组hsv基因组发生特异性重组，重组病毒感染细胞中检测到gp120和gp41，且重组hsv保留了在哺乳动物细胞中的复制能力。本研究获得携载hiv-1gp160、gag和protease基因的重组hsv，并保留了在哺乳动物细胞中的复制能力，可作为hiv-1复制型病毒载体疫苗。