利用家蚕杆状病毒表达家蚕肌质网型钙离子atp酶蛋白

肌质网型钙离子atp酶(sacro/endoplasmicreticulumca2+-atpase,serca)负责将细胞中多余的ca2+转运并存储于内质网中，从而维持细胞内适宜的ca2+环境。家蚕serca创造的细胞内及细胞外ca2+平衡对家蚕正常生命活动的维持具有重要作用。由于serca分子量较大并具有10次跨膜结构，很难在大肠杆菌表达系统中表达。为了获得具有生物学活性的重组serca蛋白，利用pfastbacdual载体构建了用于表达egfp和serca的双元杆状病毒表达载体，转染细胞后获得重组病毒，将重组病毒感染细胞后，成功地在细胞中表达了egfp和serca。通过荧光观察及westernblotting分析表明，感染后细胞中serca和egfp表达模式一致，从感染后48h开始表达，在感染后96h表达量最大。对获得的重组蛋白进行酶活分析，发现感染后48h至120h的细胞serca酶活显著提高。表明具有生物学活性的serca在此系统中成功获得表达，为深入研究serca蛋白的功能奠定了基础。