牛结核γ干扰素elispot检测方法的建立

本研究旨在建立一种牛结核γ干扰素elispot检测方法，并评价该方法用于牛结核病检测的价值。通过筛选与天然牛γ干扰素特异性结合的单克隆抗体分别作为包被抗体和检测抗体，并探索不同的实验条件确定最佳包被抗体浓度、最佳细胞数量和最佳检测抗体浓度等，建立牛γ干扰素elispot检测方法。采集30头奶牛尾静脉血并分离外周血单个核细胞，以结核菌素作为刺激原，使用建立的elispot检测方法进行牛结核病检测，并与bovigamtmelisa试剂盒检测结果进行比较。筛选到两株与天然牛γ干扰素特异性结合的单抗2g5和5e11，确定elispot检测方法的最佳实验条件为：包被抗体2g5浓度2.5μg/ml，每孔细胞数量2.5×105个，检测抗体bio-5e11浓度1μg/ml。使用建立的elispot检测方法与bovigamtmelisa试剂盒对30头奶牛进行同步检测，结果显示，以bovigamtmelisa试剂盒检测结果作为参考标准，14头bovigamtmelisa试剂盒检测阳性牛中，elispot方法检出的阳性牛为11头，敏感性为78.6%(11/14)；16头bovigamtmelisa试剂盒检测阴性牛中，elispot方法检出的阴性牛为12头，特异性为75%(12/16)。应用结核菌素作为刺激原的牛结核γ干扰素elispot检测方法可用于牛结核病辅助检测，具有潜在的临床应用价值。