利用反向遗传学技术构建h5亚型禽流感高产疫苗株

采用rt－pcr技术分别扩增了鹅源高产禽流感病毒的6条内部基因片段，近期分离的h5n1亚型禽流感病毒的血凝素基因以及n3亚型参考毒株的神经氨酸酶基因，分别构建了8个基因的转录与表达载体，利用反向遗传学技术拯救出了全部基因都源于禽源的重组流感病毒疫苗株rh5n3。通过对血凝素蛋白ha1和ha2连接肽处的5个碱性氨基酸(r-r-r-k-k)基因缺失与修饰，从而消除了病毒基因的毒力相关序列,拯救的rh5n3疫苗株对鸡和鸡胚均无致病性，病毒在鸡胚尿囊液和细胞培养上清的ha效价得到极大提高，分别为1：2048和1：512。制备的禽流感疫苗免疫动物后4～5周即可诱导产生高效价的hi抗体，鸡免疫后18周依然保持高水平的hi抗体。重组疫苗不论是对于国内早期分离的禽流感病毒a/goose/guangdong/1/96还是近期分离的a/goose/hlj/qfy/04都能够产生完全的免疫保护作用,免疫鸡攻毒后不发病、不排毒、不死亡。带有n3鉴别诊断标记禽流感疫苗株的研制为h5n1高致病性禽流感的防治提供了新的技术保障。