利用卵胞浆精子注射（icsi）技术生产转基因小鼠

在掌握小鼠icsi技术的基础上，进行了icsi技术生产转基因小鼠的研究。来自成年km小鼠附睾尾的精子，使用未加抗冻剂的hepesczb溶液，在液氮中冻融1次后，用于本实验。解冻精子与dna混匀1min后，精子头被显微注射到b6d2f1小鼠成熟卵母细胞质中。精子头与pegfpn1环状dna共注射生产的icsi受精卵，在czb溶液中培养至囊胚期时，39.1%(9/23)的囊胚表达gfp基因。精子注射后6h，直接移植icsi受精卵后，7只妊娠受体一共产仔30只，效率为23.8%(30/126)。southernblot分析其中16只小鼠发现，3只（18.8%）转基因小鼠同时整合了gfp和neomycin基因，它们全部来自精子和线性dna混合的实验组（阳性效率为33.3%，3/9），相反，精子与环状质粒dna共注射生产的7只icsi后代中，没有检测到外源基因。转基因小鼠整合的外源基因能够传递给它们后代。结果说明，利用icsi技术可以高效地生产转基因小鼠，宿主基因组可能更容易整合线性化的外源基因。