重组人瘦素的基因构建、表达及活性鉴定

根据ncbi中公布的人瘦素cdna序列，设计并合成了6个89bp左右的dna小片段,经重叠延伸pcr扩增获得464bp的rhlep的完整基因片段。构建pet22b(+)/rhlep表达载体，转化大肠杆菌bl21（de3），iptg诱导表达。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的50%以上。表达产物用ni2+亲和层析柱纯化,sds-page结果表明,含6×his标签的目的蛋白的相对分子量约16kd。mtt比色法实验显示，当低剂量（10～30ng/ml）时，rhlep具有促进内皮细胞生长的作用；在高剂量（50～225ng/ml）时，rhlep具有杀伤人内皮细胞的活性。其最大杀伤率达到98.8%。吖啶橙荧光染色观察到高剂量rhlep对人内皮细胞有明显的凋亡作用。以上工作为进一步了解瘦素的体内体外生物活性奠定了基础。