枯草芽孢杆菌cas15嗜铁素基因dhbc的克隆、表达及功能鉴定

通过pcr技术扩增得到dhbc基因,对其进行序列分析发现,dhbc基因片段长为1197bp,预期编码398个氨基酸,蛋白分子量大小为43.8kd。将目的片段连接到表达载体pet-30a(+),转化大肠杆菌escherichiacolibl21(de3)获得重组菌株bl21(de3)/pet-30a-dhbc,以iptg在30oc诱导4h实现高效表达,获得一个分子量为48.8kd的融合蛋白。重组蛋白可溶性分析结果表明:融合蛋白主要为可溶性蛋白。westernblotting分析结果表明:重组蛋白可与兔抗his-tag多克隆抗体发生特异性反应,在48.8kd处有特异条带,与预期结果一致,证明重组质粒中含有dhbc基因。通过同源重组的策略将dhbc基因敲除后重新导入,验证了dhbc基因与嗜铁素的生物合成密切相关。