h3n2亚型猪流感病毒m1基因克隆及表达特性分析

从h3n2亚型猪流感病毒感染的鸡胚尿囊液中提取病毒基因组rna,采用rt-pcr方法克隆m1全长基因,将m1基因亚克隆至pet-28a(+)表达载体中,构建重组表达质粒pet-28a-m1,将该重组质粒转化大肠杆菌bl21并经iptg诱导表达。诱导产物经sds-page电泳分析显示重组蛋白m1获得大量表达,表达蛋白纯化后免疫wistar大鼠制备多克隆抗体。westernblotting检测结果表明制备的抗m1蛋白多克隆抗体可以识别大肠杆菌表达的m1蛋白和病毒感染细胞的病毒m1蛋白。构建m1基因真核重组质粒p3xflag-cmv-7.1-m1并转染vero细胞,westernblotting检测表明抗m1蛋白多克隆抗体可以识别在vero细胞中得到表达的m1蛋白,成功建立m1基因的真核表达系统。分析了病毒感染过程中m1蛋白的变化及其作为病毒复制指示分子的可能性。鼠源m1蛋白多克隆抗体的制备和m1基因真核重组表达质粒的构建,为进一步研究猪流感病毒的复制机理以及m1蛋白在病毒复制过程中的生物学功能奠定了基础。