重组七鳃鳗细胞毒素蛋白rlj-rgd3表达及对hela细胞活性的影响

为研究重组七鳃鳗细胞毒素蛋白rlj-rgd3的抗肿瘤活性,确定其生物学地位及意义,本研究提取成体七鳃鳗(lampetrajaponica)口腔腺组织总rna,经rt-pcr获得cdna序列长度为357bp的目的基因片段,将其克隆于pet23b载体,获得带有组氨酸标签的分子量为15kd的基因重组蛋白rlj-rgd3的高效可溶性表达，通过组氨酸亲和层析纯化蛋白。采用mtt法检测不同浓度rlj-rgd3对bfgf诱导下的hela细胞增殖的抑制作用,结果表明rlj-rgd3能显著抑制hela细胞的增殖,ic50为2.6mmol/l。rlj-rgd3作用后的hela细胞经hoechst染色及dnaladder检测结果显示,细胞均发生凋亡。rlj-rgd3对hela细胞黏附玻连蛋白(vn)作用的实验结果为有效抑制。采用transwell细胞培养板对bfgf诱导下的hela细胞迁移实验表明,rlj-rgd3能够抑制hela细胞的迁移,且抑制率达60%。采用人工基质膜基质matrigel及transwell模仿体内环境研究rlj-rgd3对hela细胞浸润行为实验显示,以bfgf为趋化剂的hela细胞穿透matrigel的浸润行为明显受到抑制。以上研究表明,rlj-rgd3具有典型的rgd毒素蛋白的功能,有望应用于抗肿瘤基因工程药物开发,具有重要的生物学意义。