单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体orf1的表达及其抗凋亡作用

旨在研究单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体(lat)开放读码框1(orf1)对放线菌素d诱导的凋亡作用的影响。以hsv-2333基因组为模板pcr扩增orf1片段，构建重组质粒pegfp-orf1，转染vero细胞，rt-pcr鉴定orf1的表达。放线菌素d诱导vero细胞凋亡，通过荧光显微镜观察凋亡小体，hochest33258荧光染色观察细胞形态变化，mtt检测细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡率。双酶切和测序确认pegfp-orf1构建成功，rt-pcr表明该真核表达载体能在vero细胞中高效表达。转染了pegfp-orf1的vero细胞经放线菌素d凋亡诱导后，hochest33258染色显示细胞形态正常。mtt结果表明转染了重组质粒pegfp-orf1的vero细胞经放线菌素d凋亡诱导后vero细胞活性与未经任何处理的正常对照组相比，无显著差异(p＞0.05)，但高于放线菌素d诱导凋亡的vero细胞组及与转染空质粒pegfp-c2且放线菌素d诱导凋亡的vero细胞组，差异具有统计学意义(p＜0.05)。流式结果表明，转染重组质粒pegfp-orf1且经放线菌素d诱导凋亡组与正常对照组凋亡率差异不显著(p＞0.05)，而显著低于放线菌素d诱导凋亡组和转染空质粒pegfp-c2且经放线菌素d诱导凋亡组(p＜0.05)。hsv-2latorf1具有抗放线菌素d诱导的vero细胞的凋亡作用。