利用代谢工程构建d-甘露醇生产菌株

d-甘露醇广泛应用于食品、制药、化学品工业等领域。从野生型大肠杆菌出发，将来自假肠膜明串珠菌leuconostocpseudomesenteroidesatcc12291菌株的甘露醇脱氢酶与果糖转运蛋白编码基因整合到大肠杆菌atcc8739的染色体中，并失活其他的发酵途径(丙酮酸甲酸裂解酶、乳酸脱氢酶、富马酸还原酶、乙醇脱氢酶、甲基乙二醛合成酶和丙酮酸氧化酶)，构建了一株遗传稳定的d-甘露醇生产菌株。使用无机盐培养基和葡萄糖果糖作为混合碳源，厌氧发酵6d，d-甘露醇产量达1.2mmol/l。基于细胞生长和d-甘露醇合成的偶联，进一步通过代谢进化技术提高细胞合成d-甘露醇的生产能力。经过80代的驯化，d-甘露醇产量提高了2.6倍，甘露醇脱氢酶的活性提高了2.8倍。构建获得的遗传稳定的工程菌能直接发酵糖生产d-甘露醇，不需添加抗生素、诱导剂和甲酸，在工业化生产时有一定优势。