重组人源snx7蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及磷脂结合特异性分析

sortingnexins(snxs)是一类含有snx-px结构域，并在细胞内吞和内体分选运输过程中发挥重要调节作用的蛋白。snx7是snxs家族中的一员，含有px结构域和bar结构域，属于snx-px-bar亚家族。斑马鱼实验表明，snx7是在肝脏中大量表达的抗凋亡蛋白，并在胚胎肝脏的发育中发挥关键作用。为了从蛋白水平对snx7进行研究，首先将编码人源px-barsnx7(snx7的一个片段，包含px和bar结构域)的cdna片段插入到原核表达载体p28a中，再将重组质粒转化到大肠杆菌rosseta2(de3)中诱导表达，并用亲和层析、离子交换和分子筛层析对px-barsnx7进行了纯化。westernblotting结果表明，亲和层析、离子交换和分子筛层析纯化后获得了高纯度的px-barsnx7蛋白。动态光散射实验显示px-barsnx7蛋白均一性良好。磷脂结合实验表明，px-barsnx7具有较为广泛的磷脂酰肌醇结合能力，能够与ptdins(5)p、ptdins(4,5)p2和ptdins(3,4,5)p3结合。