圆红冬孢酵母新颖脂肪酸合酶的重组表达、纯化与活性检测

脂肪酸合酶(fattyacidsynthase，fas)催化乙酰辅酶a和丙二酸单酰辅酶a反应生成脂肪酸，是油脂合成代谢途径中最重要的酶之一。在高产油脂的圆红冬孢酵母rhodosporidiumtoruloides中发现了一种新颖的fas，它含两个亚基，与其他物种的fas相比，具有独特的结构域组成，尤其是含两个酰基载体蛋白(acp)结构域。由于acp在脂肪酸合成反应中起辅因子作用，推测多个acp有利于提高fas的催化活性，为研究该fas的生物化学和结构特征，构建了表达fas两个亚基的载体，并转化大肠杆菌escherichiacolibl21(de3)，含pet22b-fas1和pet24-fas2质粒的重组菌株zwe06可同时高表达两个亚基，经硫酸铵沉淀、蔗糖密度梯度离心和阴离子交换层析纯化，得到的重组fas比活力达到548mu/mg。纯化的fas复合物可用于后续酶动力学和蛋白结构研究，且表达与纯化方法的建立对研究其他acp的功能具有参考价值。