耐热链霉菌4″-o-异戊酰基转移酶基因在变铅青链霉菌tk24中的表达

拟研究异源调控系统提高耐热链霉菌streptomycesthermotolerans4″-o-异戊酰基转移酶基因(ist)表达的可能性。在麦迪霉素产生菌streptomycesmycarofaciens1748中曾克隆到bamhⅰ~8.0kb片段，含此基因片段的变铅青链霉菌tk24streptomyceslividanstk24转化子可将螺旋霉素高效转化为丙酰螺旋霉素。序列分析表明此片段除包含麦迪霉素4″-o-丙酰基转移酶基因(mpt)外还存在与其连锁的两个正调控基因orf27和orf28。将这个基因簇中mpt基因的orf替换为ist基因的orf，然后与orf27和/或orf28正调控基因连接，将这些构建好的片段分别克隆到中等拷贝数及高拷贝数载体pkc1139和pwhm3上，再转化到s.lividanstk24中。通过测定s.lividanstk24转化子中螺旋霉素生物转化为4″-o-酰化螺旋霉素的产率来评价mpt和ist基因的表达水平。结果表明只有高拷贝载体pwhm3构建的重组质粒s.lividanstk24转化子中才能明显检测到4″-o-异戊酰螺旋霉素的产生。mpt基因的正调节系统可以提高ist基因的表达水平，含两个调节基因的转化子转化效率高于含单一调节基因的转化子。