猪乳铁蛋白在4种重组乳杆菌中的表达及抑菌活性比较

为了获得优化的猪乳铁蛋白乳杆菌表达系统，并比较重组猪乳铁蛋白的抑菌活性，根据乳杆菌使用密码子的偏嗜性优化合成猪乳铁蛋白成熟肽编码序列，将其克隆到乳杆菌表达载体ppg612.1的xhoⅰ/bamhⅰ位点，获得了plf乳杆菌表达载体质粒ppg612.1-plf。将获得的重组质粒分别电转化入干酪乳杆菌atcc393、戊糖乳杆菌klds1.0413、植物乳杆菌klds1.0344和副干酪乳杆菌klds1.0652细胞内，获得4种表达猪乳铁蛋白的重组乳杆菌。经木糖诱导，通过westernblotting和激光共聚焦检测重组猪乳铁蛋白的表达，用elisa方法检测和比较4种重组菌上清中表达猪乳铁蛋白的量，并用琼脂孔穴扩散抑菌法检测4种重组乳杆菌表达乳铁蛋白的抑菌活性。结果表明，乳铁蛋白在4种重组乳杆菌中均得到正确表达，其产物分子量约73kda，重组干酪乳杆菌、重组戊糖乳杆菌、重组植物乳杆菌和重组副干酪乳杆菌的重组猪乳铁蛋白表达量分别为9.6μg/ml、10.8μg/ml、12.5μg/ml、9.9μg/ml。重组猪乳铁蛋白对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、巴氏杆菌和李氏杆菌均有一定的抑菌作用，对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强，且4种重组乳杆菌中重组植物乳杆菌表达产物的抑菌效果优于其他重组菌的表达产物。结果表明在4种乳杆菌中重组猪乳铁蛋白的最佳表达系统为植物乳杆菌，该结果为猪乳铁蛋白的乳杆菌表达系统进一步开发与应用奠定了基础。