重组β-葡萄糖醛酸苷酶键选择性的半理性改造

为了提高escherichiacoli重组表达的β-葡萄糖醛酸苷酶(pgus-e)的键选择性，本研究以pgus-e结构与功能关系的推测为指导，选择了可能影响pgus-e的键选择性的r329、t369、n467位点进行定点饱和突变，利用薄层层析(tlc)和高效液相色谱(hplc)对键选择进行筛选，得到优势突变酶r329k、t369v。结果显示：与pgus-e酶相比，突变酶r329k、t369v键选择性分别提高26.9%、34.3%。突变酶的酶学性质研究表明，突变酶的最适ph和温度与pgus-e一致，但其酶催化效率下降。由此可见，r329、t369对酶催化的键选择性和酶的活性有显著影响。综上结果，本文应用饱和突变方法改善了pgus-e的键选择性，为酶的结构和功能关系理解提供了实验依据。