人蛋白酶体亚基psmb1的重组表达、纯化及在蛋白酶体抑制剂体外筛选中的应用

蛋白酶体是真核细胞中的一类多亚基蛋白酶复合物，它在胞内蛋白质降解的泛素-蛋白酶体通路中起关键作用。重组表达蛋白酶体的活性亚基可以用于在体外筛选、寻找具有蛋白酶体抑制剂作用的化合物。将人蛋白酶体催化亚基（psmb1）cdna的编码区（全长726bp）克隆至原核表达载体pet28a(+)，构建重组质粒pet28a-psmb1，转化大肠杆菌bl21(de3)，通过1mmol/liptg，20℃过夜诱导，获得相对分子量约为27kda的重组蛋白，采用imac亲和层析柱纯化重组蛋白，纯化后的重组蛋白纯度超过95％。重组蛋白酶解后经nanolc-ms/ms鉴定表明所表达的融合蛋白氨基酸序列完全正确。在体外biacore分析中，重组蛋白表现出对不同化合物的选择性结合能力，其中与蛋白酶体抑制剂雷公藤红素的结合较强，10μmol/l的雷公藤红素与重组蛋白的结合达到27ru，并且具有良好的浓度依赖型。本研究建立了表达、纯化人蛋白酶体催化亚基psmb1的方法，并应用于具有蛋白酶体抑制活性化合物的体外筛选。