农杆菌介导的苜蓿次级体细胞胚的遗传转化

采用农杆菌菌株gv3101感染子叶期苜蓿体细胞胚来研究苜蓿次级体细胞胚的遗传转化方法。农杆菌菌株gv3101双相载体pcambia2301，此双相载体具有gus报告基因和nptⅱ抗卡那霉素筛选基因。感染的子叶期苜蓿体细胞在75mg/l卡那霉素筛选压下，经过一系列诱导培养，最终获得转基因植株。然后，通过gus组织化学定位分析来检测转基因植株不同器官中的gus表达，并进一步通过pcr和southern杂交确定转基因的稳定整合和转化率。结果表明转基因植株不同器官均有gus表达，整合的nptⅱ基因的拷贝数是1~4，获得的转基因植株的转化率是65.82％。