亚位点?7处突变对碱性芽胞杆菌cgt酶产物特异性的影响

为了研究来源于碱性芽胞杆菌的γ-环糊精葡萄糖基转移酶(cgt酶)具有较高产物特异性的作用机理，对其氨基酸序列和模拟结构进行了分析，确定其亚位点?7处氨基酸的缺失可能影响其产物特异性。运用重叠pcr的方法，在其亚位点?7处添加缺失的6个氨基酸，造成插入突变。将突变基因与pet-20b(+)连接并在大肠杆菌bl21(de3)中表达。以可溶性淀粉为底物进行酶转化，hplc分析转化产物中的环糊精含量。结果表明，相对于野生型γ-cgt酶，突变酶转化生成的3种环糊精中，γ-环糊精所占的比例从76.0％降至12.5％，α-、β-环糊精分别从8.7％和15.2％提高至37.5％和50％。分析其可能机理为：与α-、β-cgt酶相比，野生型γ-cgt酶的亚位点?7处缺失6个氨基酸，该构象为葡萄糖的结合提供了更大的空间，从而更适合γ-环糊精的生成；而在其亚位点?7处插入6个氨基酸，造成插入突变后，葡萄糖链结合的空间变小，这种构象不利于γ-环糊精的生成。