重组人骨形态发生蛋白-6的表达、纯化及其活性分析

利用rt-pcr从人胎盘组织中获取bmp-6成熟肽的cdna片段，并克隆到表达载体pet-15b中，构建hbmp_6成熟肽的非融合蛋白表达质粒pet-bmp6，转化e.colibl21（de3）。iptg诱导4h后，工程菌高表达rhbmp-6成熟肽，在sds-page上出现预期的新蛋白带(≈15kd)，约占菌体总蛋白的10%，表达产物以包涵体形式存在。分离和纯化的包涵体溶解于8mol/l尿素，在变性溶解状态下经阳离子交换层析,得到目的蛋白纯度达95%以上。再经稀释复性后，约80%的rhbmp-6形成同源二聚体。体外活性分析结果显示：rhbmp-6可以提高c3h10t1/2细胞碱性磷酸酶活性及促进i型胶原、osterix（osx）和骨钙素（osteocalcin）等成骨细胞表型转化标记基因mrna的表达，证明制备的rhbmp_6具有诱导非骨源性细胞分化成为成骨细胞的作用。