绿色荧光蛋白基因标记野生型生防枯草芽孢杆菌的研究

根据绿色荧光蛋白基因和枯草芽孢杆菌木糖诱导型启动子pxylr序列，分别设计两对特异引物primerspxyf/r和primersgfpf/r，扩增获得了完整的启动子pxylr和-gfp基因序列。进一步以上述产物混合物为模板，以primerpxyf/primergfpr做引物进行重迭pcr，获得了pxylr-gfp重组翻译融合表达盒。经sphⅰ和kpnⅰ完全酶切后，将pxylr-gfp表达盒分别插入大肠杆菌_苏云金芽孢杆菌穿梭载体pht315和大肠杆菌枯草芽孢杆菌穿梭载体prp22。相应的重组表达质粒pgfp315和pgfp22转化枯草芽孢杆菌感受态细胞。前者在标准菌株168中得到良好发光表型，后者则在标准菌株168和野生目标菌株b916中均得到良好的发光表型。室内平板抑菌实验结果显示b916生防效果与出发菌株没有明显差异，遗传稳定性研究表明连续稀释培养约175代后，工程菌株稳定性为94%，质粒丢失频率低于3.5×10-4/代。