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生物工程学报 2003
人leptin基因的cdna的克隆和表达Keywords: leptin,cdna克隆,融合蛋白,体外表达 Abstract: 克隆人leptin基因的cdna并获取表达的leptin蛋白，为进一步研究新的leptin相关蛋白打下基础。以人基因组dna为模板，用引物悬挂延伸pcr法，克隆与6个组氨酸（6×his）密码子相连的人leptin基因的cdna，并将其克隆到体外表达载体pivex23mcs上，通过体外快速翻译系统(roche公司的rts500环状模板试剂盒和rts500proteomaster仪器)在体外表达了带有6×his的leptin融合蛋白。经sdspage及westernblot方法鉴定，融合蛋白大小正确，有172个氨基酸，分子量为1946kd，具有特异的抗原性，且主要以可溶形式存在于反应液上清中。
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