抗cd3/抗pgp微型双功能抗体的构建和表达

构建和表达抗cd3/抗pgp微型双功能抗体，并测定该微型双功能抗体的生物学活性。采用pcr和overlappcr方法构建抗cd3/抗pgp微型双功能抗体，并用双脱氧终止法测定dna序列；采用亲和层析法纯化该产物，并用westernblot和分子排阻层析鉴定纯化产物；采用免疫荧光法、放射免疫分析法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。dna序列测定结果表明：抗cd3/抗pgp微型双功能抗体已构建成功，表达可溶性产物的产量达2mg/l以上，纯化产物中二聚体的比例达90%，具有与jurkat（cd3+）和k562/a02细胞（pgp+）结合的活性，与抗cd3scfv及抗pgpscfv的亲合常数相当。成功地构建了抗cd3/抗pgp微型双功能抗体，并获得高效表达，表达产物具有与相应二个靶抗原结合的活性。