表达血管抑制因子的腺相关病毒载体的构建及其体内外活性

血管抑制因子(vasostatin,vas),为集钙蛋白n-末端180个氨基酸大小的蛋白,是一种内源性血管生成抑制因子,对多种肿瘤的生长具有很强的抑制作用。近期有研究显示,vas可以促进神经内分泌肿瘤的恶化,提醒我们在开发该抗肿瘤药物时必需非常谨慎。将vascdna插入腺相关病毒-2表达质粒paav-2,采用无辅助病毒参与的三质粒共转染法制备raav-vas病毒。体外分别转染小鼠胰内皮细胞ms1和结肠癌细胞hct-116,mtt法测定对细胞生长的影响,westernblotting方法检测vas的表达。采用小鼠皮下移植瘤模型,验证vas的表达对肿瘤生长、新生血管密度、以及细胞增殖的作用。结果证明构建的raav-vas病毒载体,能抑制小鼠胰内皮细胞的生长,转染hct-116后能有效表达vas蛋白,但hct-116的体外生长不受影响。瘤体注射raav-vas后,hct-116移植瘤在小鼠体内的生长速度明显减缓,肿瘤新生血管密度明显降低。结果显示,raav-vas可以抑制hct-116移植瘤的新生血管形成,但对其细胞增殖无明显作用。