麦迪霉素生物合成基因克隆研究

利用穿梭粘粒载体pnj1组建了麦迪霉素产生菌streptomycesmycarolaciens1748的基因文库，用与麦迪霉素生物台成有类似途径的放线紫红素聚酮合成酶基因acti，actⅱ为探针，从麦迪霉素产生菌的基因文库中，获得了与acti，actⅱ基因有同源性的阳性克隆，对其中pcnsbl2、6c5及11e11克隆dna进行了酶切分析，其分子量分别为36kb，48．5kb及41．6kb。pcn6c5dna中包含有pcn8b32的全部dna片段，pcnⅱeⅱ与pcn8b12及pcn6c5有6．75kb的重叠区。通过分子杂交实验，初步将麦迪霉素聚酮台成酶基因定位在pcn8812dna的ecori—bamhi4．02kb片段上(与actⅱ基因有同源性)及pcn8b12(6c5)，pcniieiidnabgⅱ—bgⅱ2．42kb与pcnlle11bgli—bg1i1okb片段上(与acti基因有同源性)。pcn8b12及pcn6c5克隆dna在麦迪霉素聚酮合成酶基因缺陷型变株streptomycesmycarofaciensvar．68及不产抗生索的变铅青链霉菌streptomyceslividanstk24受体菌的表达产物，经tlc及hplc等分析表明与麦迪霉素标准品相似。