苏云金杆菌δ—内毒素基因在大肠杆菌中的克隆及表达

分离了苏云金杆菌肯尼亚亚种7404(bacillushuringiensissubsp．kenyae7404)和库斯塔克亚种(bacillusthuringiensissubsp．kwrstakihd-1)的质粒。经凝胶原位杂交证明苏云金杆菌肯尼亚亚种7404的δ—内毒素基因位于约47md大小的一个质粒上。用蔗糖密度梯度离心法从sau3a1部分酶解的上述两种苏云金杆菌质粒dna酶解片段中分离出大于4kb的dna片段，将这些片段克隆到pbr332的barnhi位点上并转化大肠杆菌hb101。通过菌落原位杂交、菌落原位放射免疫试验及westernblct分析等方法，选到了带有δ—内毒素基因并能在大肠杆菌中表达此毒蛋白的转化体。初步的生物学试验表明，在四个试验过的转化体中带有肯尼亚亚种δ—内毒素基因的转化体tk89及带有库斯塔克亚种δ—内毒素基因的转化体thl2和th48对烟青虫(heliothisassulta)有毒杀活性。