日本脑炎病毒sa14-14-2e蛋白结构域ⅲ的抗原性和免疫原性分析

为了表达日本脑炎病毒囊膜蛋白(e蛋白)结构域dⅲ区,了解其作为亚单位疫苗的可能性,本研究根据sa14-14-2病毒株序列(genbankaccessionno.d90195)设计两条引物,以全长jev感染性克隆pbr-jtf为模板,通过pcr扩增出jeve蛋白dⅲ的cdna片段,构建了原核表达载体pet-jedⅲ,转化大肠杆菌rosetta(de3)进行融合表达。融合蛋白为可溶性表达,表达量约占菌体蛋白的75%。用纯化后蛋白免疫新西兰兔和balb/c鼠,通过elisa,westernblotting,噬斑减少实验,及乳鼠攻毒实验验证jedⅲ的抗原性和免疫原性。westernblotting及elisa结果表明纯化后的表达产物具有良好的抗原性,纯化的jedⅲ蛋白免疫新西兰兔,可以获得高达1:7×105滴度的抗jev特异性抗体;jedⅲ蛋白免疫balb/c鼠,可以获得1:8.2×104滴度的抗jev特异性抗体。并且获得1:256滴度的中和抗体,乳鼠攻毒实验能达到75%的保护效果。以上结果说明本研究表达、纯化的重组jedⅲ蛋白,免疫小鼠以及兔后,能产生抗jev的特异性抗体,中和性抗体,能够保护部分乳鼠接受毒种的攻击,抗原性及免疫原性较好,有进一步开发研制成亚单位疫苗的潜能。