拟南芥wuschel蛋白的原核表达、亲和纯化和多克隆抗体制备

本研究构建了带有his标签的拟南芥(arabidopsisthaliana)wuschel基因原核表达载体pet-31b(+)-wus-his(6),优化了大肠杆菌(escherichiacoli)诱导表达体系,将亲和层析纯化后的wus融合蛋白,经尿素梯度透析复性溶解,免疫新西兰大白兔,成功制备了wus蛋白多克隆抗体。通过琼脂糖免疫扩散检测确定了抗血清效价和特异性,并以斑点杂交和westernblotting检验其灵敏性。结果表明,成功构建的拟南芥wus原核表达载体,在e.coli中以0.5mmol/l异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(iptg)28°c诱导表达10h后,融合蛋白得到高水平表达,亲和纯化后目标蛋白纯度达96%以上,所制备的多克隆抗体具有较高特异性和灵敏性,可用来检测纳克级蛋白抗原。