利用融合蛋白eddie在大肠杆菌中高效表达抗菌肽cecropinad

本研究采用猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,csfv)定点突变外壳蛋白(eddie)为融合蛋白,对抗菌肽cecropinad(cad)基因进行了高效融合表达,获得了有抗菌活性的抗菌肽cad。首先采用重叠pcr基因合成技术将编码抗菌肽的cad基因与猪瘟病毒定点突变外壳蛋白eddie编码基因合成为e-cad融合基因,接着将融合基因e-cad采用定点同源重组的方法连接到载体pet30a上,构建成peted表达载体,然后转化大肠杆菌bl21(de3)表达,表达的融合蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的40%以上。蛋白质在体外复性,融合蛋白中eddie自我剪切,产生抗菌肽cad。抑菌试验表明抗菌肽cad能有效地抑制大肠杆菌和藤黄八叠球菌的生长,并且对酵母菌的生长也有微弱地抑制作用。以eddie为融合蛋白是在大肠杆菌中高效表达抗菌肽的一种好方法。