梅毒螺旋体tpn17与tpn47表位肽融合抗原的重组表达及其酶联免疫吸附试验建立和应用

以重组tpns为抗原的elisas已被证明是具有较高敏感性和特异性的梅毒血清学检测方法,若在elisas使用多种tpns抗原,可进一步提高检测敏感性和特异性。根据抗原表位分析结果,本研究首先采用连接引物pcr获得了tpn17和tpn47抗原表位序列融合成的人工基因片段tpe17-47,然后构建了全长tpn17、tpn47基因以及tpe17-47融合基因的原核表达系统。sds-page和biorad凝胶图象分析系统检查结果显示,所构建的原核表达系统能稳定表达目的重组蛋白rtpn17、rtpn47和rtpe17-47,其产量分别约占细菌总蛋白的36%、20%和28%。采用ni-nta亲和层析法提纯的rtpn17、rtpn47和rtpe17-47蛋白经sds-page分析,均显示为单一的蛋白条带。westernblotting结果表明,rtpn17、rtpn47和rtpe17-47蛋白均可被梅毒抗体阳性的病人血清所识别。以rtpe17-47为包被抗原的rtpe17-47-elisa检测630例临床确诊梅毒患者血清标本的阳性率为98.6%,仅略高于tppa(97.9%)(p>0.05),但明显高于rtpn17-elisa(83.8%)、rtpn47-elisa(83.3%)和rpr(72.1%)(p<0.01)。上述elisas和tppa对25例sle、36例ra患者和250例健康体检者的血清标本检测结果均为阴性,但rpr分别有1、2和2例标本检测结果为阳性。本试验成功地构建了rtpe17-47抗原表位融合基因及其高效原核表达系统,所建立的rtpe17-47-elisa可作为一种快速、简便、安全、敏感和特异的梅毒血清学筛查或诊断新方法。