人乳头瘤病毒18型病毒样颗粒在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析

利用大肠杆菌表达系统可溶性表达人乳头瘤病毒18型(hpv18)l1蛋白,经过纯化和重组装过程获得hpv18病毒样颗粒(vlps),研究其免疫原性和诱发中和抗体生成的水平。首先,提取hpv18的基因组dna,通过pcr扩增获得hpv18l1基因片段,将其插入ptrxfus表达载体,在大肠杆菌中可溶性表达hpv18l1蛋白;其次,通过硫酸铵沉淀、离子交换层析和疏水相互作用层析获得高纯度的hpv18l1蛋白,而后透析去除预先加入的还原剂dtt,使hpv18l1蛋白自发组装成vlps;最后,通过动态光散射技术和透射电子显微镜鉴定hpv18vlps的大小和形态,利用假病毒细胞中和实验评价hpv18vlps在实验动物体内的免疫原性和中和抗体生成水平。结果表明,hpv18l1蛋白可以在大肠杆菌表达系统中以可溶形式表达,经过纯化的hpv18l1蛋白可以自发组装成为半径约为29.34nm、与hpv病毒外观相似的vlp。该vlps在小鼠体内的中和抗体半数有效剂量为0.006mg,在兔及山羊体内诱导中和抗体滴度高达107。总之,本研究利用原核表达系统可简便高效地获得具有高度免疫原性的hpv18vlps,为hpv18预防性疫苗的开发奠定了基础,具有重要的应用意义。