牛乳铁蛋白素(1-15)-蜂毒素(5-12)杂合肽基因的合成及在大肠杆菌中的表达

为了构建新型的杂合肽,设计了一种新型杂合抗菌肽牛乳铁蛋白素(1-15)-蜂毒素(5-12),由牛乳铁蛋白素(lfcinb)n端第1~15个氨基酸残基和蜂毒素(melittin)n端第5~12个氨基酸残基组成。根据大肠杆菌密码子的偏爱性,设计合成了杂合肽lfcinb(1-15)-melittin(5-12)的基因片段,插入到表达载体pet-32a的ncoi和sali的酶切位点之间,构建重组表达质粒。重组表达质粒转化到escherichiacolibl21(de3)中,经异丙基-b-d-硫代半乳糖苷(iptg)诱导表达,融合蛋白以可溶形式在escherichiacolibl21(de3)中获得成功表达,表达量占菌体总蛋白的35%以上,每升培养物可获得35mg融合蛋白。带his标签的融合蛋白经his×bind纯化试剂盒纯化、肠激酶切割和抑菌实验表明,杂合肽具有明显的抑菌效果。这为利用基因工程方法生产抗菌肽奠定了理论基础。