ad-stnfri-iggfc腺病毒载体的构建及其转染人气道平滑肌细胞

tnf-a是一种具有广泛生物学活性的前炎症细胞因子,参与哮喘整个病理生理过程。可溶性肿瘤坏死因子受体(stnfr)可以拮抗肿瘤坏死因子活性,已被用来治疗与tnf相关的炎性疾病。将stnfri-iggfc基因插入腺病毒穿梭质粒pdc316,与辅助质粒pbhgloxδe1,3cre共转染hek293细胞,重组产生ad-stnfri-iggfc,pcr鉴定毒种正确后,进行扩增、纯化和滴度测定,转染人气道平滑肌细胞,利用rt-pcr、免疫组化方法,流式细胞仪,elisa检测转染后细胞中stnfri-iggfc的转录和表达。实验结果证明成功构建了ad-stnfri-iggfc腺病毒载体,感染性滴度达3×1010tcid50/ml,200moi转染气道平滑肌细胞阳性率达99.32%,转染后气道平滑肌细胞在mrna和蛋白水平均有stnfri-iggfc表达。转染上清稀释64倍后仍对tnf有拮抗活性。为将表达stnfri-iggfc腺病毒基因治疗哮喘的实验研究提供了基础。