金黄色葡萄球菌重组gapc蛋白的gapdh活性及免疫原性分析

为研究金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)表面gapc蛋白的gapdh活性、免疫原性及免疫保护作用,应用pcr方法扩增出s.aureus的gapc基因,插入到pqe-30载体相应位点,构建重组质粒pqe/gapc。将其导入宿主菌e.colim15(prep4)后,iptg诱导表达。重组蛋白纯化后进行gapdh活性检测,并与灭活全菌体分别免疫健康家兔。然后,应用elisa方法检测血清中igg抗体水平及ifn-g、il-4细胞因子浓度,并用1.0×108cfu/mls.aureus菌株wood46对免疫家兔攻毒。sds-page结果显示,gapc蛋白在e.colim15(prep4)中获得表达;经gapdh活性检测及westernblot检测,重组蛋白具有较高的gapdh活性和抗原特异性;经elisa检测,gapc蛋白及全菌体组兔血清中igg抗体水平迅速升高,并在加强免疫后第28天达到最高(1:64000),加强免疫后第14d,血清中细胞因子ifn-g和il-4浓度与对照组相比,显著升高(p<0.05),而全菌体免疫组升高不明显(p>0.05);攻毒结果为蛋白免疫组家兔获得一定的免疫保护(4/5)。以上结果表明,表达的重组gapc蛋白具有gapdh活性、较好的免疫原性及免疫保护力,可作为深入研究s.aureus基因工程疫苗的良好靶向。