携带fmdv前导蛋白基因逆转录病毒载体的构建及其在牛肾细胞中的表达

以口蹄疫病毒株oa/58rna为模板,反转录并扩增目的cdna。通过分子克隆技术将前导蛋白编码序列lab与逆转录病毒载体pbpstr1连接,将构建正确的重组载体命名为pbpstr1-lab。通过分别利用不同浓度的嘌呤霉素和四环素来确定最佳筛选浓度和最佳调控浓度,结果显示嘌呤霉素的最佳筛选浓度为3mg/ml,四环素的最佳调控浓度为1mg/ml。利用pbpstr1-lab和包装质粒pvsv-g双质粒瞬时转染gp2-293包装细胞来获得重组逆转录病毒。利用重组逆转录病毒来感染牛肾细胞,并连续筛选12天来获得阳性克隆。通过除去四环素来诱导目的基因在牛肾细胞中表达,发现牛肾细胞病变死亡。经过pcr和蛋白质免疫印迹证实稳定表达前导蛋白的牛肾细胞系已经建立,为今后研究前导蛋白致病机理提供了平台。