戊型肝炎病毒荧光定量rt-pcr快速检测技术的建立和初步应用

利用dnaman软件对genbank登录的戊型肝炎病毒四个主要基因型代表株的序列进行分析,选择其高度保守的orf2区域设计合成引物和探针,并用包含有扩增区域的核苷酸片段进行体外转录制备标准品crna。在对荧光定量rt-pcr的反应条件优化的基础上,建立了适用于戊型肝炎病毒主要基因型检测的荧光定量rt-pcr检测技术。该检测技术可以有效检测i型和iv型戊型肝炎阳性病料,而对猪的其它几种疫病阳性病料则为阴性结果,证实本技术的特异性强、可靠性好。对阳性标准品的检测结果表明,所建立的taqman荧光定量rt-pcr灵敏度可达2.0×101拷贝/反应,相比于巢式rt-pcr方法,其灵敏度高10~100倍以上。在对54份临床样品的检测中,进一步证实了该方法快速、灵敏且重复性好,可满足戊型肝炎病毒早期快速诊断的需要。