基于逆转录病毒载体的外源基因表达系统的评价和应用

逆转录病毒表达系统是基因治疗研究和rna干扰技术广泛采用的外源基因表达系统。文中以增强型绿色荧光蛋白(egfp)基因的表达水平和稳定性为指标，比较逆转录病毒表达载体pqcxin和pcdna3.1(+)表达质粒介导的外源基因在hek293细胞和cho-k1细胞的表达效率。病毒感染hek293细胞和cho-k1细胞的相对荧光强度(relativefluorescenceintensity，rfi)均约为对应的质粒转染细胞的2倍。多轮反复感染逆转录病毒表达载体能有效提高hek293细胞表达egfp的效率。hek293细胞经4轮病毒感染后的rfi值较1次病毒感染的rfi值约提高2倍。此外，逆转录病毒表达载体介导的外源基因表达的稳定性优于质粒转染的外源基因表达。采用携带人重组活性蛋白c(recombinanthumanactivatedproteinc，rhapc)基因的pqcxin和hek293细胞进一步验证了逆转录病毒载体介导的外源基因表达效率，构建了rhapc表达水平为10~15mg/(106cells·d)的hek293细胞系。研究结果表明，逆转录病毒表达系统是有应用价值的介导外源基因在哺乳动物细胞高效表达的技术途径。