酿酒酵母乙醇脱氢酶2(adh2)基因的克隆表达及活性验证

为了从酿酒酵母saccharomycescerevisiae中克隆出乙醇脱氢酶2(alcoholdehydrogenase2，adh2)基因并使之在大肠杆菌中高效表达。以酿酒酵母细胞中提取的总rna为模板，通过反转录获得酿酒酵母乙醇脱氢酶2基因，连接到表达载体ptat上，得到重组表达质粒ptat-adh2，将此重组质粒转化到大肠杆菌bl21中，重组工程菌株经iptg诱导表达得到adh2蛋白。将该蛋白纯化后，在体外进行活性检测和小鼠体内进行毒理试验，检测adh2的酶活性。测序结果表明克隆的基因与genbank中所报道的adh2基因序列有90％的同源性，经sds-page电泳分析，目的蛋白得到了有效表达，蛋白条带扫描分析表明，表达量占总蛋白的50％左右，纯化得到的蛋白在小鼠体内进行毒理试验，显示出一定的活性。酿酒酵母adh2基因的克隆正确，不仅在大肠杆菌中进行了高效表达而且表现出了较好的酶活性。