blatem-116型超广谱β-内酰胺酶的表达、纯化及其应用

为大量获取低成本的tem-116超广谱β-内酰胺酶，并分析其降解环境中β-内酰胺类抗生素残留物的可行性，本研究在escherichiacolibl21(de3)菌株中表达了重组tem-116超广谱β-内酰胺酶，经亲和层析纯化、柱复性与分子筛层析纯化，得到了高纯度的目的蛋白，对其理化性质进行了分析。结果表明，重组tem-116超广谱β-内酰胺酶的分子量、比活性分别为30kda和476iu/mg，与天然酶性质相近。重组酶在体内外对多种青霉素、头孢菌素类药物均具有较高降解效率：10iu酶可清除1l发酵液中7000mg的青霉素g；320iu酶可清除1l尿液中各200mg的青霉素g、氨苄青霉素和头孢唑林混合抗生素；1.0~2.5iu的酶可在4℃~37℃温度范围内清除1l牛奶中80u的青霉素g；2.0×104~2.3×104iu/(kg?bw)的酶能够清除小鼠体内8.0×104~9.1×104μg/(kg?bw)的青霉素g。