重组人kallistatin蛋白在毕赤酵母中的高效表达及生物活性分析

为了研究kallistatin(kal)的生物活性，本实验构建了可分泌表达kal的毕赤酵母菌株。首先通过pcr方法从paav-kal中扩增出kalcdna，并克隆至酵母表达载体ppic9，得到甲醇酵母分泌型表达载体ppic9-kal，然后将载体线性化并电击转化毕赤酵母gs115(his4)，通过md平板筛选出阳性表达菌株。阳性表达菌株在bmmy培养基(ph7.0)中29℃培养，经2％甲醇诱导表达96h，摇瓶表达量可达14mg/l。表达上清经phenylsuperose、heparinsepharoseff分离纯化，目的蛋白纯度达到98％，分子量为58kda。生物活性实验显示，所得到的kal蛋白具有较好的抗氧化活性，过氧化物酶活性达到(163±4)u/(mg?min)，可有效降低h2o2对lx-2细胞的氧化损伤。另外，重组产生的kal还能抑制huvec细胞的增殖。本研究首次成功地利用毕赤酵母表达系统分泌表达了有生物活性的kal，为继续开展其抗肿瘤活性奠定了基础。