高效可溶性重组蛋白表达载体的构建

本研究构建了两种高效表达可溶性重组蛋白的原核表达载体。一种载体由hissumo序列与pet30a(+)载体连接而成(命名为hissumoexpress)，表达的融合蛋白用ni-nta纯化，用sumo蛋白酶i切割后可获得不留任何残基的重组蛋白。sumo-蛋白酶i价格较贵，为减少表达蛋白的成本，第二种载体即在his-sumo和目的序列之间加入羟胺切割位点(命名为hissumoeconomic)。在hissumoeconomic中表达的融合蛋白用ni-nta纯化，羟胺液切割后可获得仅留一个甘氨酸残基的重组蛋白。以在常规表达载体中难以表达的鼠源成纤维细胞生长因子-21(mfgf-21)为例，经葡萄糖消耗实验检测其活性，验证两种表达载体的效果。结果表明mfgf-21在两种载体中均获得了高效表达，融合蛋白占菌体总蛋白的40％以上，ni-nta纯化后的融合蛋白分别利用羟胺切割液和sumo蛋白酶i切割，纯化的mfgf-21成熟蛋白回收量约为54mg/l，回收率约为6％。经两种载体表达后的mfgf-21蛋白均具有生物学活性，可促进脂肪细胞消耗葡萄糖，为进一步研究提供了基础。