布氏锥虫苯丙氨酰-trna合成酶在大肠杆菌中的克隆、表达、纯化及活性测定

苯丙氨酰-trna合成酶是布氏锥虫蛋白合成过程中的一类重要酶，以其为靶点的抑制剂可能发展成为新一代的抗锥虫药物，但此前并没有分离锥虫苯丙氨酸-trna合成酶的报道。本研究用大肠杆菌成功克隆表达并纯化了布氏锥虫苯丙氨酰-trna合成酶并进行了活性测定。首先通过pcr方法从布氏锥虫细胞基因组中分别扩增出苯丙氨酰-trna合成酶的α亚基、β亚基的基因，依次克隆入pcoladuet共表达载体，然后在大肠杆菌bl21(de3)ripl中进行了成功表达，并采用ni-bind亲和层析对其进行了纯化，最后用免疫印迹进行了鉴定。此外还采用放射性同位素方法进行了酶活性测定，这为下一步进行布氏锥虫苯丙氨酰-trna合成酶抑制物的设计和体外筛选奠定了良好的基础。