hbx-egfp-tlm融合蛋白表达载体的构建、蛋白表达纯化及活性检测

乙型肝炎病毒x蛋白(hbx)具有广泛的转录激活作用，但是由于细胞类型和实验条件的差异，外源启动子介导的hbx瞬时表达水平常表现出不均一性，为其功能的研究带来困难。为了解决hbx研究过程中遇到的这些难题，利用pcr扩增获得hbx及含转导肽tlm的egfp编码序列，经酶切后插入pgex-4t-1原核表达载体，成功构建重组质粒pgex-hbx-egfp-tlm和pgex-egfp-tlm。重组质粒转化大肠杆菌bl21(de3)感受态细胞，融合蛋白经iptg诱导表达，采用?ktatmpurifier蛋白纯化系统纯化并进行sds-page和westernblotting分析，确定为目的蛋白。将纯化后的融合蛋白分别与aml12和smmc-7721细胞共孵育，westernblotting和激光共聚焦显微镜检测证实tlm转导肽能够介导hbx-egfp和egfp进入细胞，同时进入细胞的hbx-egfp-tlm能够发挥转录激活活性，为hbx功能的深入研究奠定了基础。