恶性疟合成多肽抗原基因在大肠杆菌中表达产物的分离纯化

我们用化学方法合成的两个恶性疟原虫杂合抗原基因，即a基因和b基因〔1.2〕，分别与表达载体pwr450·1重组并转化到大肠杆菌使其表达〔3.4〕。经筛选获得了pwr／a·7和pwr／b·164两个表达较高的克隆菌(经扫描测定表达融合蛋白量分别为菌体总蛋白的8．8％和11．o％)。叉将a基因和b基因串连后与pwr450·l重组并转化到大肠杆菌jml03株，经筛选鉴定获得了上述两个基因串连的pwr／ab·20克隆菌(表达融合蛋白量为35．8％)。为了进一步研究这3个克隆菌表达蛋白的免疫功能等活性，用8．0mol／l脲处理包涵体，离心沉淀上清液进行deae-ephacel柱层析，用tris梯度缓冲液洗脱，但分离效果不好，而应用page方法进行分离纯化，则可得到电泳纯、稳定又具有免疫原性的产物。