抑癌蛋白pten的原核表达、抑癌活性研究和抗体制备

pten是具有蛋白质和酯类双重特异性磷酸酶活性的抑癌蛋白，在肿瘤治疗中具有广阔的应用前景。鉴于原核表达pten蛋白并用于抑癌实验的研究尚未见报道，因此尝试利用大肠杆菌表达有活性的pten蛋白，检测其抑癌效果。利用本室克隆的pten基因cdna和原核表达载体pet-44a(+)分别构建带6×his和nus标签的两种诱导型原核融合表达载体petpten和pet-nus-pten，在不同的大肠杆菌表达宿主bl21（de3）（简写为bl）和rosetta-gami(de3)plyss（简写为rg）中诱导表达。sds-page和westernblot检测表明：在可溶性组分和包涵体中均含有目的蛋白，在bl中目的蛋白的表达量较高(18.7%)而在rg中可溶性蛋白的比例较高(6.6%)。经纯化和包涵体蛋白复性处理后，重组融合蛋白经chariot转运入小鼠实体瘤及人前列腺癌du-145细胞。抑癌实验表明：与对照组相比，重组pten蛋白对小鼠实体瘤的生长抑制率为58.76%；对癌细胞du-145的生长抑制率可达46.16%；并可导致明显的g0/g1期阻滞，其中在宿主rg中表达的重组蛋白抑癌效果明显高于bl宿主中表达的目的蛋白。证实在原核系统中表达的重组pten蛋白具有抑癌活性，同时制备了pten的高效价腹水多抗，为深入研究pten蛋白在癌症治疗中的应用打下了良好的基础。