人sbcmacdna的克隆、高可溶性融合表达及活性分析

bcma是除taci外baff和april共用的另一细胞表面受体。为了研究sbcma作为拮抗受体的可能及获得活性sbcma蛋白用做结构功能研究，我们以rt-pcr法从人b系非洲淋巴瘤细胞株raji总rna中扩增出人bcma的全长cdna，经克隆测序证实所克隆的基因为人bcma。继而通过嵌套pcr扩增出胞外可溶区（sbcma，46个氨基酸组成，含有一个6个半胱氨酸的保守crd,构成3个二硫键）cdna，构建原核表达载体pet43.1a(+)sbcma，在大肠杆菌菌株origamib(de3)plyss中高可溶性融合表达出重组蛋白sbcma-nusa-his6，同时克隆表达了融合蛋白nusa-his-6。经ni+nta亲和纯化后的目的蛋白进行细胞学实验表明sbcma能特异阻断baff促小鼠b细胞的增殖作用，而nusa-his6则不能，证实我们所表达得到的受体胞外可溶性片段sbcma与配体具有较高的结合活性。sbcma融合蛋白的成功表达将为二硫键富含类蛋白的表达提供参考，并为研究其临床应用以及baff和april受体结构和功能的关系奠定基础。