农杆菌转化的小冠花发状根的诱导及其植株再生

利用野生型发根农杆菌15834菌株感染小冠花15日龄无菌苗子叶和下胚轴切段，建立了高效的发状根培养及其体细胞胚胎发生再生体系。发状根可直接从受伤的外植体表面产生，也能在外植体诱导的愈伤组织上发生，在无外源激素的ms固体和液体培养基上,转化根能自主生长，表现出典型的发根特征。用适宜浓度的乙酰丁香酮处理对数生长期的农杆菌菌液2h，感染预培养2d的子叶获得了最高的转化频率（87.4%）。在附加0.2mg/l2,4-d,0.5mg/lnaa和0.5mg/lkt的ms培养基上，发状根能100%形成胚性愈伤组织，并于含0.5mg/lkt,0.2mg/liba和300mg/l脯氨酸的ms培养基上顺序经过体细胞胚胎发育的各个典型时期，转换成完整植株。再生植株除具有发达的侧根外，其它形态特征与未转化植株未见明显的差异，但在获得的5个转化克隆中，其中1个的发状根及其再生植株叶片中有毒物质3-硝基丙酸的含量显著下降，分别为未转化对照的57.68%和58.17%。冠瘿碱纸电泳检测和rolb基因pcr扩增检测均证明农杆菌ri质粒上的t-dna已经整合到小冠花转化细胞的基因组中。