igfbp-3在真核细胞中的分泌表达及功能分析

将人胰岛素样生长因子结合蛋白3(igfbp-3)的cdna片段亚克隆入psectaga载体,构建真核分泌型表达载体psectag-igfbp3。采用脂质体转染的方法将真核表达载体转染人肾癌786-o细胞,转染48h后用免疫印迹法检测igfbp-3的表达状况;同时以annexinv-egfp/pi染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察分泌表达的igfbp-3对宿主细胞的促凋亡作用。转染48h后,经westernblotting检测,在细胞培养上清中有分泌表达的igfbp-3蛋白。流式细胞技术检测结果表明,表达产物可直接作用于宿主细胞,发挥促肿瘤细胞凋亡的作用。由此表明所构建的重组表达质粒psectag-igfbp3能在真核细胞水平正常表达并发挥生物学功能,为进一步探索igfbp-3的作用机制奠定了基础。